細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

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公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、*、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測服務(wù)，同時(shí)提供最新價(jià)格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。公司產(chǎn)品僅用于科研，不得用于臨床．

注意事項(xiàng)：
1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐ＷC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
腺苷酸環(huán)化酶9抗體

細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

CM-R097大鼠皮下脂肪細(xì)胞*培養(yǎng)基100mLN-叔丁氧羰基-L-酸，英文名或英文縮寫：BOC-L-Alanine，級別：BR，99%，規(guī)格：25克

CTLA4 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 CTLA4 / CD152 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 3-錄-2,2-二基炳醋 99% 3-CHLORO-2,2-DIMqTHYLPROPIONIC cCID 13211-38-1

小鼠顆粒細(xì)胞MGCpotewwiumSULFATE,ANxy7noUS無水鉀ACS級白色結(jié)晶RTsigma

UI-1細(xì)胞，人前列腺癌細(xì)胞 大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞,IEC-6細(xì)胞 人氣管平滑肌細(xì)胞HTSMC對羥基本乙鹽酸鹽，英文名或英文縮寫：Tyramine xy7nochloride，級別：BR，98%，規(guī)格：5克

HOS(人骨肉瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2134-31-68-羥基鹽;-8-羥基;氧化;奎諾蘇8-xy7noxyinoneoline sulfate;8-inoneopxenol sulfate;Oxine sulfate;inoneosol;Chinosol
U266細(xì)胞，人骨髓瘤細(xì)胞 串珠鐮刀菌 人胚腎二倍體細(xì)胞;HEK-2尼羅替尼-d3Nilotinib-d3質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

TE-11(人食管癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×27α-硫代甲基螺內(nèi)酯-d7 (主要的)7α-Thiomethyl Spironolactone-d7 (Major)質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

HO-8910(人卵巢癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 mCF, 小鼠心臟成纖維細(xì)胞 人APP-PS1雙基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株(HEK293);APP-PS17α-硫代甲基螺內(nèi)酯7α-Thiomethyl Spironolactone質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

人微血管內(nèi)皮細(xì)胞裂解物HDMECL7α-硫代螺內(nèi)酯7α-Thio Spironolactone質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

PRSS27 Others Human 人 PRSS27 / Pancreasin / Marapsin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 6β-羥基-7α-(硫代甲基) 螺內(nèi)酯6β-Hydroxy-7α-(thiomethyl) Spironolactone質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
人Ph+急淋白血病細(xì)胞Mo7e細(xì)胞，人巨細(xì)胞白血病細(xì)胞株 小鼠正常肝細(xì)胞,NCTC1469細(xì)胞 角臘上皮細(xì)胞生長添加物CEpiCGS五味子酚（標(biāo)準(zhǔn)品）schisanhenol  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

NCI-H226(人肺鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2FMOC-3,5-二-L-酪氨酸FMoc-Tyr(3,5-I2)-OH質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

BT-474(人導(dǎo)管癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CM-M085小鼠表皮角化細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL 人Burkkit瘤細(xì)胞;Daudi10-脫乙酰巴卡亭(標(biāo)準(zhǔn)品)10-Deacetylbaccatin III質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

非洲綠猴腎細(xì)胞系/IgRCD4+;VERO/IgRCD4+10-脫乙酰巴卡亭10-Deacetylbaccatin III質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

DDR2 Others Rat 大鼠 DDR2 Kinase / CD167b 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 維生素B1(標(biāo)準(zhǔn)品)vitamin B1質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99%，標(biāo)準(zhǔn)品
細(xì)胞接受后的處理：
1） 收到細(xì)胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。
2） 請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的的*培養(yǎng)基。
4） 如果細(xì)胞長滿（90%以上）請及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代。
5） 接到細(xì)胞次日，請檢查細(xì)胞是否污染，